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首先无菌是最重要的,而且温度要适宜。温度是以什么种类的细胞来确定的,各种细胞所适宜的温度都是不一样的。培养液的酸碱度也是一个重要的因素,培养液必须酸碱度适合细胞生长且包含细胞生长的全部营养,且温度适度,酶的浓度也要把握好。

动物细胞培养需要哪些条件

还有:震动,病毒。

  诱导细胞融合的方法有三种:生物方法(病毒)、化学方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(离心,震动,电刺激)。某些病毒如:仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白(fusion protein),可介导病毒同宿主细胞融合,也可介导细胞与细胞的融合,因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变,去掉作用因素之后,质膜恢复原有的有序结构,在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。

培养基的差异:动物细胞的培养基是液体培养基、血清培养基,而植物培养基是固体培养基。

以下是动物培养基和植物培养基的具体内容:

动物培养基:

1.动物细胞培养液的成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。动物细胞培养成功的关键在于培养液中是否含有动物血清,因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。

 2.动物细胞培养液的特点:液体培养基、含动物血清。

植物培养基:

( 1 )愈伤组织诱导培养基: MS 培养基(蔗糖含量为 10 g/L , 2,4 – D 含量为 2 mg/L ,琼脂 10 g/L )。

 ( 2 )试验培养基:在 MS 培养基中加入 IAA 和 6–BA 。

 吲哚乙酸(IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解, 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解,然后用蒸馏水稀释,再加入培养基中。

希望能帮助您。^__^

动物细胞的结构

一、细胞培养的条件和要求

1.所有与细胞接触的设备、器材和溶液等,都必须保持绝对无菌,避免细胞外微生物的污染。

目前最可靠和最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。

如:玻璃制品、布类、金属制品:6.8kg20min。

橡胶制品:3.6~4.5kg10min。

培养用液,如Hanks液,水解乳蛋白:3.6~ 4.5kg10min。

实验中染菌物品和动物尸体等:6.8 kg20min。

试管、吸管等,则可采用干热灭菌;

一切不适于加热灭菌的液体,如人工合成培养液、小牛血清、胰蛋白酶等溶液,可采用过滤法除菌。

细胞培养中常用的消毒剂浓度及其使用场合

2.必须有足够的营养供应,而绝对不可有有害的物质,包括极微量的有害离子的掺入,为此必须注意器材的清洗和配液用水的质量。

细胞培养中对水的质量要求很高(见水处理)。

3.保证有适量的氧气供应。

细胞代谢需要有空气,否则细胞死亡。在用培养瓶进行静止培养,或用转瓶进行旋转培养时,只要培养的液体量不超过总容量的30%,通过与液面的空气交换,可以保证细胞有足够的氧气。当用罐子深层培养时,则必须通气,一般采用含5%CO2的空气,或根据需要将CO2、N2、O2和空气以不同比例混合,过量氧对细胞的生长也不利。

4.需随时清除细胞代谢中产生的有害产物。

细胞在代谢过程中会产生大量代谢废物,如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等,这些产物对细胞的生存有害,必须及时清除。在小量培养时,当培养基中酚红指示剂显示**,表示已有相当量乳酸产生,要及时更换新鲜的培养基。在大量培养时,则需随时测定葡萄糖和乳酸等含量,并调节灌流速度,使代谢产物保持在无害水平下。

5.有良好的适于其生存的外界环境,包括温度、pH、渗透压和离子浓度等。

不同的细胞对pH的要求不同,一般来说适于细胞生长的pH在6.8~7.4,过高或过低均不利于细胞生长。如上所述,细胞在代谢过程中会产生大量乳酸,使培养的pH下降。为了保持培养液的pH,常在培养液内加入各种缓冲系统,如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3(CO2)、Tricineglycine,以及加缓冲剂Hepes液(常用浓度为10~50mol/L).

6.及时分种,保持合适的细胞密度(见细胞传代)

动物细胞培养的取材要求

关于“动物细胞的结构”如下:

动物细胞的基本结构有细胞膜、细胞质、细胞核.植物细胞的基本结构包括:细胞壁、细胞膜、细胞质、胞核、液泡、叶绿体等结构。

一、动物细胞简介

动物细胞立体结构图组成动物体的细胞称为动物细胞(Animal Cell),植物细胞和动物细胞大体上相同,都有细胞核、细胞质和细胞膜。但是也有不同的地方:这就是植物细胞在细胞膜外面有一层厚而坚硬的细胞壁,而动物细胞没有细胞壁。

二、细胞培养液的成分

葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。动物细胞培养成功的关键在于培养液中是否含有动物血清。

因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。

三、动物细胞与植物细胞的区别

培养基不同,植物细胞(固体培养基),动物细胞(液体培养基)。培养基的成分不同,动物细胞培养必须利用动物血清,植物组织培养则不需要。过程不同,植物组织培养的过程为脱分化和再分化,动物细胞培养的过程为原代培养和传代培养。

产物不同,植物组织培养最后一般得到新的植物个体,而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性,因此得到的是同一种的细胞。原理不同,植物组织培养的原理为植物细胞的全能性,动物细胞培养的原理为细胞的增殖。

四、细胞膜

细胞膜是一层由蛋白质分子和磷脂双层分子组成的薄膜,水和氧气等小分子物质能够自由通过,而某些离子和大分子物质则不能自由通过。

因此,它除了起着保护细胞内部的作用以外,还具有控制物质进出细胞的作用:既不让有用物质任意地渗出细胞,也不让有害物质轻易地进入细胞。

细胞培养--培养细胞的取材 人和动物体内绝大部分组织都可以在体外培养,但其难易程度与组织类型、分化程度、供体的年龄、原代培养方法等有直接关系,原代取材是进行组织培养的第一步。 取材的基本要求 (1)取材的组织最好尽快培养。因故不能即时培养,可将组织浸泡于培养液内,放置于冰浴或4度冰箱中。如果组织块很大,应先将其切成1cm3以下的小块再低温保存,但时间不能超过24h。 (2)取材时应严格无菌操作,用无菌包装的器皿或用事先消毒好的,带少许培养液的小瓶等便于携带的物品取材,取材过程中要尽量避免紫外线照射和接触化学试剂如碘、汞等。从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材时,为减少污染,可用含500~1000单位/ml的青链霉素液漂洗5~10min,或用10%达克宁注射液冲洗浸泡10min再做培养. (3)取材和原代培养时,要用锋利的器械如刮脸刀片切碎组织,尽可能减少对细胞的机械损伤. (4)对于血液.脂肪.神经组织.结缔组织和 坏死组织,取材时要细心出去,修剪和切碎过程中,为避免组织干燥,可将其浸泡于少量培养液中. (5)原代培养,特别是正常细胞的培养,应采用营养丰富的培养液,最好添加胎牛血清,含量为10%~20%为宜. (6)一般来讲,胚胎组织较成熟个体的组织容易培养,分化底的较分化高的组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养.如无特殊要求,可采用易培养的组织进行培养,成功率较高. (7)为了便于以后鉴别原代组织的来源和观察细胞体外培养后与原组织的差异性,原代取材时要同时留好组织学标本和电镜标本.对组织的来源.部位.包括供体的一般情况要做详细的记录,以备以后查询. 取材的基本器材和用品 (1)眼科组织剪.弯镊.手术刀(用前消毒) (2)装有无血清培养基或Hank's液的小瓶 (3)小烧杯(10ml,50ml) (4)培养皿(特殊用途物品详见后面章节) 皮肤和粘膜的取材 皮肤和粘膜是上皮细胞培养的重要组织来源.一般皮肤黏膜主要取自手术过程中切除的部分组织,如特殊需要也可酌情单独取材.方法似外科取断层皮片手术的操作,但面积一般2~3mm2即可.这样局部不留疤痕.注意取材时不要用碘酒消毒. 皮肤黏膜培养多是以获取上皮细胞为目的,因而无论何种方法取材都不要切取太厚并要尽可能去除所携带的皮下或者黏膜下组织.如欲培养成纤维细胞则反之,皮肤.粘膜分布在机体外部或与外界相通的部位,故表面细菌.霉菌很多.取材时要严格消毒,必要时用较高浓度的 抗菌素溶液漂洗. 内脏和实体瘤的取材 人和动物体内所发生的肿瘤及各脏器是较常用的培养材料.内脏除消化道外基本是无菌的,但有些实体瘤有坏死并向外破溃者可能被细菌污染.内脏和实体瘤取材时,一定要明确和熟悉自己所需要组织的类型和部位,要去除不需要的部分如血管.神经和组织间的结缔组织,取肿瘤组织时要尽可能取肿瘤细胞分布较多的部分,避开坏死液化部分.但有些复发性.浸润性较强的肿瘤较难取到较为纯净的瘤体组织,其肿瘤组织与结缔组织混杂在一起,培养后会有很多纤维细胞生长,给以后的培养工作增加困难.对于一些特殊细胞培养的取材,详见以后的介绍。 血液中的白细胞是很常用的培养材料,常用于进行染色体分析.淋巴细胞体外激活进行免疫治疗等.一般多采用静脉取血,微量时也可以从指尖或耳垂取血.为防止凝血重用肝素抗凝剂,抗凝剂的量以产生抗凝效果的最小量为宜,量过大易导致溶血.肝素常用浓度为20U/ml,抽血前针管也要用浓度较高的肝素(500U/ml)湿润.抽血时要严格无菌. 骨髓.羊水.胸水.腹水内细胞的取材 要根据各种有关操作规程进行.详见以后的章节.这几种样品取材后一般不需要其它处理,离心后最好立即培养,不易低温保存. 鼠胚组织的取材 由于鼠胚组织取材方便,易于培养,同时与人类相近都是哺乳类动物,已成为较常用的培养材料.因为小鼠的毛中隐藏微生物较多,而且不易消毒.所以取材时更要注意无菌消毒,其无菌消毒一般采用以下方法进行:首先用引颈法杀死动物,然后将其整个浸入盛有75%酒精的烧杯中5min,注意时间不能太长以免酒精从口和其它孔道进入体内,影响组织活力.取出后放在消毒过的小木板上,用消毒过的图钉或大头钉将其固定.然后用眼科剪和止血钳剪开皮肤解剖取材.也可在酒精消毒后,在动物躯干中部环形剪开皮肤,用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾把动物反包,暴露躯干,然后在固定解剖 取材.区号的组织要放置在另一干净的平皿中或玻璃板上进行原代培养操作.动物消毒后的操作宜在超净台内或无菌环境中进行

关于“细胞培养的注意事项”这个话题的介绍,今天小编就给大家分享完了,如果对你有所帮助请保持对本站的关注!

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