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实验中波长的选择主要依赖于你要测的样品。样品在不同的波长下,对光的吸收值也不同,但都有一个吸收峰,一般选择吸收峰时的波长进行实验。比如同样是MTT法做细胞毒性实验,就有使用490nm和570nm两种波长选择,如果使用了DMSO作为试剂,在溶解后呈紫(红)色,在490nm有最大吸收值;而对于SDS和酸化异丙醇,则选用570nm(655nm作为参考波长)。

酶标仪波长设定还要看你用的是什么酶标仪,如果是光栅式单色器(可以1nm步进调节),就可以直接设定吸收峰的波长;如果是滤光片式单色器,因为受滤光片波长限制,有时你就需要选接近使用波长的滤光片,比如655nm,你就可能选用650nm的滤光片。

酶标仪是一种用途广泛的生物检验医疗设备,利用酶联免疫分析法,根据酶标记原理,根据呈色物的有、无和呈色深浅进行定性或定量分析。这是一种极具生命力的免疫学技术。可用于单克隆抗体筛分、凝血分、抗生素灵敏度检验,以及其它需要进行比色的分析工作中。该仪器适用于临床检验、微生物学、流行病学、免疫学、内分泌学以及农林科学等领域。广泛用于医院、血站、防疫站、生物制品等部门。

我国卫生行政主管部门已明确规定,对多发常见的肝炎病诊断,不能用目测进行,必须用酶标仪判断。没有酶标仪或不用酶标仪的医院不能上等级,也没有判断肝炎的资格和权利。对于有蔓延趋势的艾滋病毒的判断,必须建立专门的艾滋病实验室并采用酶标仪进行判断。

分类

酶标仪是实验室常用的一种仪器,一般可以按照滤光方式的不同和功能的不同进行划分。

一. 按照功能的划分,酶标仪可以分为光吸收酶标仪,荧光酶标仪,化学发光酶标仪和多功能的酶标仪.光吸收酶标仪是用来进行可见光与紫外光吸光度的检测.特定波长的光通过微孔板中的样品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量与样品的浓度呈一定的比例关系,由此可以用来定性和定量的检测.光吸收的检测技术成熟,成本低,操作简单,但是动态范围窄,灵敏度比较低,特异性不强.一般可见光和紫外光分别采用钨灯及氘灯作为光源,而紫外/可见酶标仪是可以将两种光源进行切换,适应不同测量波长的需求。

荧光酶标仪是用来进行荧光的检测.通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上后,会发出波长更长的发射光,通过发射光栅后到达检测器.荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例.荧光检测灵敏度高,可实时检测,使用方便,检测模式多样,但是容易受外界干扰,激发光与发射光容易互相影响,干扰检测.化学发光是来自生物化学反应中的自发光,可分为辉光型和闪光型两种类型.辉光型发光持久,稳定,能持续一段时间;闪光型发光时间短,变化快,稳定性不强,需要应用自动加样器才可以进行.化学发光中发出的光子数与样品量呈一定比例关系,化学发光酶标仪灵敏度非常高,动力学范围广.多功能酶标仪是以上三种酶标仪的集合,比如BioTek的Synergy H1/H4,它集成了两种或者三种酶标仪于一体,可以同时进行光吸收,荧光和化学发光的检测,功能强大,使用范围广,可作为研究平台,避免了重复购买,是实验室的首选.

二. 酶标仪基于滤光方式的不同可分为滤光片式的酶标仪和光栅式酶标仪.滤光片式酶标仪采用滤光片来进行波长的选择,酶标仪内置滤光片轮,可选择试验所需的不同波长的滤光片来进行分光,光源发出的全波谱光经过滤光片后,大部分被过滤,只剩下滤光片本身允许的波长通过,这样就可就通过滤光片来获得特定的波长.滤光片轮一般包含4-6块滤光片,通过选择不同的滤光片可获得不同的波长,但是获得的波长都是固定的,受到一定的限制,不能获得任意所需的波长,而且更换滤光片价格比较昂贵. 一般波长固定的滤光片有405,450,490,630nm。

光栅式酶标仪虽然才出现短短十余年,但是发展非常迅猛,现在已经是主流的酶标仪.比如BioTek的Synergy Mx/H1m,它采用光栅进行分光,光源发出的全波谱光线经过光栅后,通过光栅上面分布的一系列狭缝的分光,就可以获得任意波长的光,波长连续可调,一般递增量为1nm, 同时具有带宽可选的功能.光栅式酶标仪使用方便灵活,可以通过软件选择任意波长的光,而且可以进行全波长的扫描,通过全波长扫描可以获得未知样品的吸收峰,从而可以达到检测未知样品的目的,在实验室中很受欢迎,可以进行更多实验的检测.因此目前在国内的普及程度很高.另外根据通道的个数,可以将酶标仪分为单通道和多通道两种类型,单通道又有自动和手动两种之分。

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